KHẢO SÁT THÀNH PHẦN LOÀI PHỤ VÀ THÀNH PHẦN KIỂU HUYẾT THANH CỦA CÁC CHỦNG SALMONELLA NHIỄM TRONG THỰC PHẨM (Mục lục)

2.2 Vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm đối với Salmonella ......................................11 2.2.1 Salmonella trong thực phẩm ......................................................................... 11 2.2.2 Tình hình nhiễm Salmonella trong thực phẩm ............................................. 12 2.2.3 Các chỉ tiêu về Salmonella trong thực phẩm ............................................... 12 2.3 Phát hiện Salmonella bằng phương pháp nuôi cấy ............................................... 14 2.3.1 Giai đoạn tiền tăng sinh .............................................................................. 14 2.3.2 Giai đoạn tăng sinh chọn lọc ...................................................................... 14 2.3.3 Giai đoạn phân lập ....................................................................................... 15 2.3.4 Khẳng định bằng các phản ứng sinh hóa ..................................................... 17 2.3.5 Phản ứng huyết thanh ngưng kết trên phiến kính để định nhóm hay loại vi khuẩn............................................................................................................... 18 2.3.6 Các phản ứng sinh hóa xác định các loài phụ Salmonella ........................19 2.4 Một số phương pháp kiểm tra nhanh Salmonella ..............................................21 2.4.1 Phương pháp dựa trên DNA ......................................................................... 22 2.4.1.1 Phương pháp PCR ................................................................................. 22 2.4.1.2 Phương pháp Realtime – PCR ................................................................ 22 2.4.1.3 Phương pháp lai phân tử ......................................................................... 22 2.4.2 Phương pháp dựa trên kháng nguyên – kháng thể ....................................... 23 2.4.2.1 Phương pháp ELISA................................................................................. 23 2.4.2.2 Phương pháp miễn dịch huỳnh quang .................................................. 23 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH ................................................. 24 vi 3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện ........................................................................... 24 3.2 Vật liệu ................................................................................................................... 24 3.2.1 Dụng cụ và thiết bị ....................................................................................... 24 3.2.2 Hóa chất và môi trường .............................................................................. 24 3.2.3 Vật liệu thí nghiệm ....................................................................................... 27 3.3 Phương pháp .......................................................................................................... 27 3.3.1 Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu ..................................................... 27 3.3.2 Phương pháp bảo quản chủng vi sinh vật ..................................................... 27 3.3.3 Phát hiện Salmonella spp. trong thực phẩm bằng phương pháp nuôi cấy . . 28 3.3.3.1 Tiền tăng sinh .......................................................................................... 28 3.3.3.2 Tăng sinh chọn lọc ................................................................................. 28 3.3.3.3 Phân lập .................................................................................................. 29 3.3.3.4 Phục hồi .................................................................................................. 30 3.3.3.5 Khẳng định bằng thử nghiệm sinh hóa..................................................... 30 3.3.3.6 Khẳng định Salmonella bằng kháng huyết thanh ................................. 32 3.3.4 Xác định S. enterica I ................................................................................. 35 vii 3.3.5 Nhận định kết quả ....................................................................................... 37 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.............................................................................. 38 4.1 Khảo sát tỉ lệ tương đối giữa Salmonella enterica I và Salmonella spp. trong các nhóm thực phẩm............................................................................................ 38 4.2 Tỉ lệ phân bố tương đối các loài phụ trong số các chủng Salmonella phân lập được từ các nhóm thực phẩm ......................................................................................41 4.3 Tỉ lệ phân bố các kiểu huyết thanh Salmonella trong các nhóm thực phẩm ........ 43 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ................................................................................. 47 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO................................................................................... 49 viii